Southern Blot analízis

A Southern blot analízis egy módszer a DNS specifikus formáinak azonosítására a sejtekben. Edwin Southern brit biológus fejlesztette ki 1975-ben.

Ennél a módszernél a DNS-molekulákat először kivonják a sejtekből, majd restrikciós endonukleázok segítségével kis fragmentumokra vágják. Ezeket a DNS-fragmenseket agaróz gélelektroforézissel választjuk el.

Ezután a DNS-fragmenseket kapilláris blottolással átvisszük a membránra. Ezután radioaktívan jelölt vagy fluoreszcens festékkel jelölt DNS-próbát használunk, amely komplementer a vizsgált DNS-szekvenciával. Ez a próba hibridizálódik a membránon lévő komplementer DNS-fragmensekkel.

A hibridizációt követően autoradiográfiával vagy fluoreszcenciával meghatározzuk a próba pozícióját a membránon, ami lehetővé teszi a kívánt DNS-szekvencia azonosítását az elválasztott fragmentumok között.

Így a Southern blotting lehetővé teszi a specifikus DNS-szekvenciák jelenlétének kimutatását a vizsgált sejtek vagy szövetek genomjában.

Összehasonlításképpen, hasonló módszerek léteznek az RNS (Northern-blot) és a fehérjék (Western-blot) azonosítására.

A Southern blot analízis egy olyan módszer, amelyet a DNS specifikus formáinak kimutatására használnak a sejtekben. Ezt a módszert Edward Southern fejlesztette ki 1975-ben, és azóta a molekuláris biológia egyik leggyakrabban használt módszerévé vált.

A módszer elve az, hogy DNS-molekulákat vonnak ki a sejtekből, és restrikciós enzimek segítségével sok kis fragmentumra vágják. Ezeket a fragmentumokat azután agarózgél-elektroforézissel méret szerint elválasztjuk. A keletkező DNS-fragmenseket nitrocellulózra vagy más membránra visszük át, amelyet ezután speciális génpróbával kezelünk. A génpróba egy rövid nukleotidszekvencia, amely specifikusan kötődik a DNS egy meghatározott régiójához. A membránnak a génpróbával történő hibridizálása után a megmaradt nem hibridizált próbát eltávolítják, és csak a hibridizált DNS-fragmensek maradnak a membránon.

Autoradiográfiát vagy fluoreszcens mikroszkópiát használnak a DNS egy adott formájának membránon való jelenlétének meghatározására. Autoradiográfia esetén a membránt egy fotoemulziós réteggel vonják be, amelyet ezután filmre tesznek. Fluoreszcens mikroszkópia esetén speciális fluoreszcens jelöléseket visznek fel a membránra, amelyek a hibridizált DNS-fragmensekhez kötődnek.

Ez a módszer számos előnnyel rendelkezik más módszerekkel szemben, mint például a Northern blotting és a Western blotting. Például a Southern blotting segítségével meghatározhatja a DNS specifikus formáinak jelenlétét egy szervezet genomjában, valamint helyzetüket és mennyiségüket. Ezenkívül ez a módszer használható a genom méretének, a génszerkezetnek és a DNS számos más jellemzőjének meghatározására.

Összefoglalva, a Southern-blot egy hatékony technika a DNS tanulmányozására, és a molekuláris biológia számos területén alkalmazható, beleértve a genetikát, az immunológiát, az onkológiát és más területeket.

A Southern blot analízis egy módszer a DNS specifikus formáinak azonosítására a sejtekben, és a molekuláris biológiában használják a genetikai variációk elemzésére. Ez a DNS-molekulák fragmensekre történő szétválasztásán alapul restrikciós enzimek segítségével, majd az azonos szakaszok próbával történő kimutatásán.

A Southern-blot elvégzéséhez a sejteket először lizálják, és a DNS-t elválasztják a sejtkomponensektől. A DNS-t ezután restrikciós enzimek segítségével fragmensekre választják el. A DNS-fragmenseket nitrocellulóz membránra visszük át, amely a próba hordozójaként szolgál. A próba lehet radioaktív, fluoreszcens vagy biotinnal jelölt, és specifikus szekvenciákat tartalmazó DNS-hez kötődik.

Ezt követően a membránt átvisszük egy gélre, amely olyan DNS-fragmenseket tartalmaz, amelyeket korábban felvittek rá. A DNS-fragmenseket méretük alapján választják el a gélen, és festéssel detektálják a próbához kötött DNS-fragmenseknek megfelelő sávokat.

A Southern blottingot genetikai variációk, például mutációk, polimorfizmusok és amplifikációk kimutatására használják. Használható továbbá a génexpresszió meghatározására különböző szövetekben és különböző ingerekre adott válaszként.

Más blottolási módszerekkel (pl. Northern és Western blotting) eltérően a Southern blottolás nagy specificitású és érzékenységű, és kis mennyiségű DNS elemzésére használható. Ez hasznos eszközzé teszi az emberi genetika, az orvosi genetika és más, a DNS tanulmányozásával foglalkozó tudományterületek tanulmányozására.