Саузерн-Блоттінг (Southern Blot Analysis)

Саузерн-блот (Southern blot analysis) - це метод ідентифікації специфічних форм ДНК у клітинах. Він був розроблений британським біологом Едвіном Саузерном у 1975 році.

У цьому методі молекули ДНК спочатку витягуються з клітин, а потім за допомогою рестрикційних ендонуклеаз розрізають на невеликі фрагменти. Ці фрагменти ДНК поділяються за допомогою електрофорезу в агарозному гелі.

Далі фрагменти ДНК переносяться на мембрану методом капілярного блот. Потім використовується мічений радіоактивним або флуоресцентним барвником ДНК-зонд, комплементарний послідовності ДНК, що досліджується. Цей зонд гібридизується з комплементарними фрагментами ДНК на мембрані.

Після гібридизації авторадіографії або флуоресценції визначають положення зонда на мембрані, що дозволяє ідентифікувати послідовність ДНК, що шукається, серед розділених фрагментів.

Таким чином, саузерн-блот дозволяє виявляти наявність специфічних послідовностей ДНК в геномі досліджуваних клітин або тканин.

Для порівняння, існують схожі методи ідентифікації РНК (нозерн-блот) і білків (вестерн-блот).

Саузерн-Блоттінг (Southern Blot Analysis) - це метод, який використовується для визначення конкретних форм ДНК у клітинах. Цей метод був розроблений Едвардом Саузерном в 1975 році і з тих пір став одним з найчастіше застосовуваних методів молекулярної біології.

Принцип роботи методу полягає в тому, що молекули ДНК витягуються з клітин і розрізаються на безліч невеликих фрагментів за допомогою ферментів, що рестриктують. Потім ці фрагменти відокремлюються один від одного за розміром за допомогою електрофорезу в агарозному гелі. Отримані фрагменти ДНК переносяться на нітроцелюлозну або іншу мембрану, яка потім обробляється спеціальним генним зондом. Генний зонд є короткою послідовністю нуклеотидів, яка специфічно зв'язується з певною ділянкою ДНК. Після гібридизації мембрани з генним зондом, будь-який залишився негібридизований зонд видаляється, і на мембрані залишаються тільки гібридизовані фрагменти ДНК.

Для визначення наявності конкретної форми ДНК на мембрані використовується авторадіографія чи флуоресцентна мікроскопія. У разі авторадіографії мембрана покривається шаром фотоемульсії, яка потім витримується плівці. У разі флуоресцентної мікроскопії на мембрану наносяться спеціальні флуоресцентні мітки, які зв'язуються з гібридизованими фрагментами ДНК.

Даний метод має ряд переваг перед іншими методами, такими як нозерн-блот і вестерн-блот. Наприклад, за допомогою саузерн-блот можна визначити наявність специфічних форм ДНК в геномі організму, а також їх положення і кількість. Крім того, цей метод може бути використаний для визначення розміру геному, структури генів та багатьох інших характеристик ДНК.

На закінчення, саузерн-блот є потужний метод для вивчення ДНК і може бути використаний в багатьох областях молекулярної біології, включаючи генетику, імунологію, онкологію та інші.

Саузерн блот (Southern blot analysis) - це метод ідентифікації специфічних форм ДНК у клітинах, який використовується в молекулярній біології для аналізу генетичних варіацій. Він заснований на поділі молекул ДНК на фрагменти за допомогою рестрикційних ферментів та подальшої детекції ідентичних ділянок за допомогою зонда.

Для проведення Саузерн блот, клітини спочатку лізуються і ДНК відокремлюється від клітинних компонентів. Потім ДНК поділяється на фрагменти з використанням рестриктивних ферментів. Фрагменти ДНК переміщуються на нітроцелюлозну мембрану, яка є носієм для зонда. Зонд може бути радіоактивним, флуоресцентним або біотин-міченим, і він зв'язується з ДНК, що містить певні послідовності.

Після цього мембрана переноситься на гель, що містить ДНК-фрагменти, які були попередньо нанесені на нього. ДНК-фрагменти поділяються на гелі в залежності від їх розміру, і смуги, що відповідають зонд-зв'язаним ДНК-фрагментам, виявляються шляхом фарбування.

Саузерн блот використовується для визначення генетичних варіацій, таких як мутації, поліморфізми та ампліфікації. Він також може використовуватися для визначення експресії генів у різних тканинах та у відповідь на різні стимули.

На відміну від інших методів блот (наприклад, Нозерн і Вестерн блот), Саузерн блот має високу специфічність і чутливість і може бути використаний для аналізу невеликих кількостей ДНК. Це робить його корисним інструментом вивчення генетики людини, медичної генетики та інших галузей науки, пов'язаних з вивченням ДНК.