Bakteriofaqların titrasiyası bakteriofaqların müəyyən bir bakteriya mədəniyyətinə münasibətdə aktivliyini təyin etmək üsullarından biridir. Bu üsul bakteriofaqların bakteriya hüceyrələrini parçalamaq (məhv etmək) və ya bərk mühitdə bakteriyaların qazonunda mənfi koloniya yaratmaq qabiliyyətinə əsaslanır.
Bakteriofaqı titr etmək üçün lizisə məruz qalacaq bakteriyaların süspansiyonunu və müxtəlif seyreltmələrdə bakteriofaqın süspansiyonunu hazırlamaq lazımdır. Daha sonra bakterial və faj süspansiyonları müəyyən nisbətlərdə qarışdırılır, bundan sonra bakterial böyümənin inkişafı və bakteriofaqın təsiri altında bakterial hüceyrələrin lizisi müşahidə olunur.
Bakteriofaqın fəaliyyəti onun süspansiyonunun minimum konsentrasiyası ilə qiymətləndirilir, bu zaman bakteriya hüceyrələrinin tam məhv edilməsi və ya mənfi koloniyanın formalaşması müşahidə olunur. Buna 50% lizis konsentrasiyası (LC50) deyilir.
Bakteriofaqın titrlənməsi biotexnologiyada böyük əhəmiyyət kəsb edir, çünki o, bakteriofaqın bakterial kulturalar üzərində effektivliyini müəyyən etməyə və təcrübə üçün optimal seyreltməni seçməyə imkan verir.
Bakteriofaqların titrlənməsi: Aktivliyin və effektivliyin təyini
Giriş
Bakteriofaqlar xüsusi olaraq bakteriya hüceyrələrini yoluxduran və məhv edən viruslardır. Onlar bioloji tədqiqatlarda, eləcə də bakterial infeksiyaların müalicəsində güclü vasitədir. Bakteriofaqların fəaliyyətini və effektivliyini qiymətləndirmək üçün bakteriofaq titrasiyası kimi tanınan prosedur həyata keçirilir. Bu üsul bir suspenziyada aktiv faqın konsentrasiyasını təyin etməyə imkan verir ki, bu da bakteriofaqların istehsalında və istifadəsində mühüm mərhələdir.
Bakteriofaq titrləmə proseduru
Bakteriofaqların titrasiyası onların maye qida mühitində bakterial kulturaları lize etmək və ya bərk qida mühitində bakterial qazonda mənfi koloniyalar yaratmaq qabiliyyətini öyrənməklə həyata keçirilir. Bu prosedur fagların ardıcıl seyreltilməsinə və sonradan ev sahibi bakteriyaya təsirinin qiymətləndirilməsinə əsaslanır.
Addım 1: Faj qatılmalarının hazırlanması
Orijinal fag preparatı bir sıra ardıcıl seyreltmələrdə seyreltilir. Hesablama asanlığı üçün adətən onluq və ya ikili qatılmalardan istifadə olunur. Hər bir seyreltmə yüksək konsentrasiyadan başlayaraq tədricən azalan müəyyən bir bakteriofaq konsentrasiyasını ehtiva edir.
Addım 2: Bakterial çəmənliyin hazırlanması
Bakteriya təbəqəsi agar kimi bərk böyümə mühitində böyüyərək bakterial çəmənlik əmələ gətirir.
Addım 3: Bakterial çəmənliyə faj seyreltmələri tətbiq edin
Bakteriya çəməninin səthinə fagın ardıcıl seyreltmələri tətbiq olunur. Hər bir seyreltmə agar səthində ayrı bir hüceyrəyə tətbiq olunur.
Addım 4: İnkubasiya
Tərkibində seyreltmələr olan agar plitələri bakteriofaqların bakteriyalara yoluxmasına və lizisə və ya mənfi koloniyaların yaranmasına səbəb olmaq üçün optimal temperatur və vaxt şəraitində inkubasiya edilir.
Addım 5: Nəticələri qiymətləndirin
İnkubasiyadan sonra nəticələr bakteriya çəmənliyində lizis sahələri və ya mənfi koloniyaları müşahidə etməklə qiymətləndirilir. Zonaların və ya koloniyaların sayı, eləcə də onların ölçüləri ilkin suspenziyada bakteriofaqın konsentrasiyası ilə bağlıdır.
Addım 6: Titr hesablanması
Qiymətləndirmənin nəticələrinə əsasən, bakteriofaqın titri müəyyən edilir. Titr müəyyən həcm və ya kütlə vahidində aktiv faqların sayını ifadə edir.
nəticələr
Bakteriofaqların titrlənməsi fagların aktivliyini və effektivliyini təyin etmək üçün mühüm vasitədir. Aktiv fagın konsentrasiyasının müəyyən edilməsi bakteriofaqların müxtəlif tətbiqlərdə, o cümlədən bioloji tədqiqatlarda və bakterial infeksiyaların terapiyasında istifadəsi üçün dozanı və optimal şərtləri təyin etməyə imkan verir. Bakteriofaqların titrlənməsi fagların ardıcıl seyreltilməsi və onların bakterial mədəniyyətlərə təsirinin sonrakı qiymətləndirilməsi ilə həyata keçirilir.
Bu üsul ilkin suspenziyada aktiv faqların konsentrasiyasını təyin etməyə və onların bakteriya çəmənində bakteriyaları lize etmək və ya mənfi koloniyalar yaratmaq qabiliyyətini qiymətləndirməyə imkan verir. Titrləmə nəticələri həcm və ya kütlə vahidləri ilə ifadə edilən bakteriofaq titrini hesablamaq üçün istifadə edilə bilər.
Bakteriofaqların titrlənməsi müxtəlif sahələrdə praktik əhəmiyyət kəsb edir. Elmi tədqiqatlarda o, yeni bakteriofaq təcridlərinin effektivliyini müəyyən etməyə və ya faglar və bakteriyaların qarşılıqlı təsir mexanizmlərini tədqiq etməyə kömək edir. Tibbdə bakteriofaqların titrlənməsi infeksiyaların müalicəsində bakteriofaqların dozasını təyin etmək və ya sənaye miqyasında istehsal olunan bakteriofaqların keyfiyyətinə nəzarət etmək üçün istifadə edilə bilər.
Yekun olaraq, bakteriofaqların titrlənməsi bakteriofaqların fəaliyyətini və effektivliyini qiymətləndirmək üçün mühüm vasitədir. Bu üsul aktiv faqların konsentrasiyasını təyin etməyə və bakteriofaqların elmdə və tibbdə müxtəlif tətbiqləri üçün zəruri olan titrin hesablanmasına imkan verir.