バクテリオファージの滴定

バクテリオファージの力価測定は、特定の細菌培養物に対するバクテリオファージの活性を測定する方法の 1 つです。この方法は、バクテリオファージが細菌細胞を溶解 (破壊) する能力、または固体培地上の細菌叢内に陰性コロニーを形成する能力に基づいています。

バクテリオファージを滴定するには、溶解を受ける細菌の懸濁液と、さまざまな希釈液でのバクテリオファージの懸濁液を調製する必要があります。次に、細菌とファージの懸濁液が特定の割合で混合され、その後、バクテリオファージの影響下での細菌の増殖と細菌細胞の溶解が観察されます。

バクテリオファージの活性は、細菌細胞の完全な破壊または陰性コロニーの形成が観察される懸濁液の最小濃度によって評価されます。これは 50% 溶解濃度 (LC50) と呼ばれます。

バクテリオファージの滴定は、細菌培養物に対するバクテリオファージの有効性を判断し、実験に最適な希釈率を選択できるため、バイオテクノロジーにおいて非常に重要です。

バクテリオファージの滴定: 活性と効率の測定

導入

バクテリオファージは、細菌細胞に特異的に感染して破壊するウイルスです。これらは、生物学的研究や細菌感染症の治療において強力なツールです。バクテリオファージの活性と有効性を評価するには、バクテリオファージ滴定として知られる手順を実行します。この方法により、懸濁液中の活性ファージの濃度を測定できます。これは、バクテリオファージの製造および使用における重要なステップです。

バクテリオファージ滴定手順

バクテリオファージの力価測定は、液体栄養培地中で細菌培養物を溶解する能力、または固体栄養培地上の細菌叢で陰性コロニーを形成する能力を研究することによって行われます。この手順は、ファージの段階希釈とその後の宿主細菌に対する影響の評価に基づいています。

ステップ 1: ファージ希釈液の調製

元のファージ調製物を一連の段階希釈で希釈します。通常、計算を容易にするために、10 進数または 2 進数の希釈が使用されます。各希釈液には一定濃度のバクテリオファージが含まれており、最初は高濃度から徐々に濃度を下げていきます。

ステップ 2: 細菌芝生の準備

細菌の層は寒天などの固体増殖培地上で増殖し、細菌叢を形成します。

ステップ 3: ファージ希釈液を細菌叢に適用する

ファージの段階希釈物を細菌叢の表面に適用します。各希釈液を寒天表面上の別々の細胞に適用します。

ステップ 4: インキュベーション

希釈液を含む寒天プレートを最適な温度および時間条件下でインキュベートすると、バクテリオファージが細菌に感染し、溶解または陰性コロニーの形成が引き起こされます。

ステップ 5: 結果を評価する

インキュベーション後、細菌叢内の溶解領域または陰性コロニーを観察することによって結果が評価されます。ゾーンまたはコロニーの数、およびそれらのサイズは、最初の懸濁液中のバクテリオファージの濃度に関係します。

ステップ 6: 力価の計算

評価結果に基づいて、バクテリオファージの力価が決定される。力価は、所定の体積または質量単位内の活性ファージの数を表します。

結論

バクテリオファージ滴定は、ファージの活性と効率を決定するための重要なツールです。活性ファージの濃度を決定することで、生物学的研究や細菌感染症の治療など、さまざまな用途でバクテリオファージを使用するための用量と最適な条件を確立することができます。バクテリオファージの力価測定は、ファージを段階希釈し、その後細菌培養物に対するファージの影響を評価することによって実行されます。

この方法を使用すると、最初の懸濁液中の活性ファージの濃度を決定し、細菌を溶解する能力や細菌叢上に陰性コロニーを形成する能力を評価できます。滴定結果は、体積または質量あたりの単位で表されるバクテリオファージ力価を計算するために使用できます。

バクテリオファージの滴定は、さまざまな分野で実際的に重要です。科学研究では、新しいバクテリオファージ分離株の有効性を判定したり、ファージと細菌の相互作用メカニズムを調査したりするのに役立ちます。医学では、バクテリオファージ滴定は、感染症の治療におけるバクテリオファージの用量を決定したり、工業規模で生産されるバクテリオファージの品質を管理したりするために使用できます。

結論として、バクテリオファージ滴定は、バクテリオファージの活性と効率を評価するための重要なツールです。この方法により、科学や医学におけるバクテリオファージのさまざまな応用に必要な、活性ファージの濃度の決定と力価の計算が可能になります。