Вестерн-Блоттінг (Western Blot Analysis)

Вестерн-блот (Western Blot Analysis) - це методика виявлення наявності певних білків у зразках біологічних тканин або рідин. Цей метод заснований на використанні електрофорезу для поділу білків за їхньою молекулярною вагою, а потім на виявленні окремих білків за допомогою антитіл, мічених радіоактивними речовинами.

Процес вестерн-блоту починається з поділу білків у зразках за допомогою гелевої електрофорезної техніки. Потім білки переносяться на спеціальну мембрану, яка може бути виготовлена ​​з різних матеріалів, таких як нітроцелюлоза, полівінілдифлуорид (PVDF) або нейлон. На цій мембрані білки стають доступними для зв'язування з антитілами.

Далі на мембрану додаються антитіла, специфічні для білків, що шукаються. Антитіла зв'язуються з білками на мембрані, утворюючи комплекси антитілобілок. Потім мембрану наносяться мічені радіоактивними речовинами вторинні антитіла, які зв'язуються з первинними антитілами. Побічні антитіла містять радіоактивні мічені ізотопи, які можуть бути виявлені за допомогою рентгенівського дослідження.

Після того, як мембрана була оброблена радіоактивними міченими антитілами, вона піддається рентгенологічному дослідженню. Це дозволяє ідентифікувати присутність або відсутність білків на мембрані. Результати можна аналізувати та інтерпретувати за допомогою спеціального програмного забезпечення.

Вестерн-блот є потужним інструментом для аналізу білків у зразках біологічних тканин і рідин. Він широко використовується в біохімічних та молекулярних дослідженнях, а також у діагностиці різних захворювань.

Існують також інші методи блот, такі як Саузерн-блот (Southern Blot Analysis) для аналізу ДНК і Нозерн-блот (Northern Blot Analysis) для аналізу РНК. Однак, вестерн-блот є основним методом для аналізу білків і широко використовується в біологічних дослідженнях.

Вестерн-Блоттінг (Western Blot Analysis) – це метод ідентифікації та виявлення певних білків у зразках біологічних тканин або рідин. Цей метод широко використовується в молекулярній біології та імунології для аналізу протеїнів, їх концентрації та розмірів.

Процедура Вестерн-Блоттінга включає кілька етапів. Спочатку, білки із зразка поділяються за розміром та зарядом за допомогою електрофорезу на поліакриламідному гелі. Потім білки переносяться на нітроцелюлозний або PVDF (полівінілдифлуоридний) мембрану. Далі слідує етап блокування, на якому мембрана обробляється розчином білка (зазвичай BSA або молочний білок) для запобігання неспецифічному зв'язку антитіл з мембраною. Потім мембрана інкубується з первинним антитілом, специфічним для шуканого білка. Після цього слід інкубація з вторинним антитілом, який містить мічений радіоактивною речовиною флуорофор або фермент, здатний показати наявність білка, що шукається.

Однією з головних переваг методу Вестерн-Блотінг є його висока чутливість. Цей метод може виявляти дуже малі кількості білка, що шукається, що дозволяє використовувати його в широкому спектрі наукових досліджень і діагностичних процедурах. Крім того, метод Вестерн-Блоттінга дозволяє визначити як концентрацію, так і розміри білка, що шукається.

Існують також інші методи блот, такі як Нозерн-блот (Northern Blot Analysis), що використовується для ідентифікації РНК, і Саузерн-блот (Southern Blot Analysis), що використовується для ідентифікації ДНК. Однак, метод Вестерн-Блотінг залишається найбільш поширеним методом для ідентифікації білків.

На закінчення Вестерн-Блоттінг (Western Blot Analysis) – це потужний метод для аналізу білкових молекул, який широко використовується в молекулярній біології, біохімії та імунології. Він дозволяє ідентифікувати та вимірювати концентрації та розміри шуканого білка, і його висока чутливість робить його незамінним інструментом у багатьох наукових дослідженнях та діагностичних процедурах.

Вестерн-блот (WB, Western Blot) - це метод аналізу білків шляхом використання електрофорезу та мічення радіоактивним ізотопом. Цей метод широко застосовується в біохімії, молекулярній біології, імунології, генетиці та інших галузях науки, де потрібний детальний аналіз білків.

Ключовим етапом WB є одержання окремих білкових фракцій шляхом електрофорезу. Потім білки поділяються на їх молекулярних мас і нанесені на нітроцелюлозну мембрану. Білки, які є на мембрані, можуть бути ідентифіковані за допомогою антитіл, мічених радіоактивною речовиною.

Після нанесення мічених антитіл на мембрану проводиться рентгенівська обробка осередку з антитілами для виявлення білків за допомогою спеціалізованих процесорів зображення. Аналізуючи інтенсивність смуг на зразку, можна визначити концентрацію кожного білка та порівняти з контролем.

Вестерн-блотинг є методом експрес