Western Blot Təhlili

Western Blot Analizi bioloji toxumaların və ya mayelərin nümunələrində müəyyən zülalların mövcudluğunu aşkar etmək üçün bir üsuldur. Bu üsul zülalları molekulyar çəkilərinə görə ayırmaq üçün elektroforezdən istifadə etməyə və sonra radio ilə işarələnmiş antikorlardan istifadə edərək fərdi zülalları aşkar etməyə əsaslanır.

Western blotting prosesi gel elektroforez texnikasından istifadə edərək nümunələrdə zülalların ayrılması ilə başlayır. Zülallar daha sonra nitroselüloz, polivinil diflorid (PVDF) və ya neylon kimi müxtəlif materiallardan hazırlana bilən xüsusi membrana köçürülür. Bu membranda zülallar antikorlara bağlanmaq üçün əlçatan olur.

Daha sonra membrana istənilən zülallara xas olan antikorlar əlavə edilir. Antikorlar membrandakı zülallarla birləşərək antikor-zülal kompleksləri əmələ gətirir. Radiolabeled ikincil antikorlar daha sonra membrana tətbiq edilir və birincil antikorlara bağlanır. İkinci dərəcəli antikorlar rentgen şüalarından istifadə edərək aşkar edilə bilən radio ilə işarələnmiş izotopları ehtiva edir.

Membran radioaktiv olaraq etiketlənmiş antikorlarla müalicə edildikdən sonra rentgen müayinəsinə məruz qalır. Bu, membranda arzu olunan zülalların varlığını və ya olmamasını müəyyən etməyə imkan verir. Nəticələri xüsusi proqram təminatı ilə təhlil etmək və şərh etmək olar.

Western blotting bioloji toxuma və maye nümunələrində zülalların təhlili üçün güclü vasitədir. O, biokimyəvi və molekulyar tədqiqatlarda, həmçinin müxtəlif xəstəliklərin diaqnostikasında geniş istifadə olunur.

DNT analizi üçün Southern Blot Analysis və RNT analizi üçün Northern Blot Analizi kimi digər ləkələmə üsulları da mövcuddur. Bununla belə, Western blotting protein analizi üçün əsas üsuldur və bioloji tədqiqatlarda geniş istifadə olunur.

Western Blot Analizi bioloji toxumaların və ya mayelərin nümunələrində spesifik zülalları müəyyən etmək və aşkar etmək üçün bir üsuldur. Bu üsul molekulyar biologiya və immunologiyada zülalları, onların konsentrasiyasını və ölçüsünü təhlil etmək üçün geniş istifadə olunur.

Western Blotting proseduru bir neçə addımdan ibarətdir. Birincisi, nümunədən alınan zülallar poliakrilamid gel elektroforezindən istifadə edərək ölçüsü və yükü ilə ayrılır. Sonra zülallar nitroselüloz və ya PVDF (polivinil difluorid) membranına köçürülür. Sonra, antikorların membrana qeyri-spesifik bağlanmasının qarşısını almaq üçün membranın bir protein məhlulu (adətən BSA və ya süd proteini) ilə müalicə olunduğu bloklama mərhələsi gəlir. Sonra membran maraq zülalına xas olan əsas antikorla inkubasiya edilir. Bunun ardınca, arzu olunan zülalın mövcudluğunu göstərə bilən radio-etiketli flüorofor və ya fermenti ehtiva edən ikincil antikorla inkubasiya aparılır.

Western Blot metodunun əsas üstünlüklərindən biri onun yüksək həssaslığıdır. Bu üsul hədəf zülalın çox az miqdarını aşkarlaya bilir və onun geniş spektrli elmi tədqiqat və diaqnostik prosedurlarda istifadə edilməsinə imkan verir. Bundan əlavə, Western Blot metodu istədiyiniz proteinin həm konsentrasiyasını, həm də ölçüsünü təyin etməyə imkan verir.

RNT-ni müəyyən etmək üçün istifadə edilən Northern Blot Analizi və DNT-ni müəyyən etmək üçün istifadə edilən Southern Blot Analizi kimi digər ləkələmə üsulları da var. Bununla belə, Western blotting protein identifikasiyası üçün ən çox yayılmış üsul olaraq qalır.

Yekun olaraq qeyd edək ki, Western Blot Analizi zülal molekullarını təhlil etmək üçün güclü texnikadır və molekulyar biologiya, biokimya və immunologiyada geniş istifadə olunur. O, maraq doğuran zülalın konsentrasiyalarını və ölçülərini müəyyən etməyə və ölçməyə imkan verir və yüksək həssaslığı onu bir çox elmi tədqiqat və diaqnostik prosedurlarda əvəzsiz alətə çevirir.

Western blotting (WB, Western Blot) elektroforez və radioaktiv izotopların etiketlənməsindən istifadə edərək zülalların təhlili üsuludur. Bu üsul biokimya, molekulyar biologiya, immunologiya, genetika və zülalların ətraflı təhlilinin tələb olunduğu digər elm sahələrində geniş istifadə olunur.

DB-də əsas addım elektroforez yolu ilə fərdi protein fraksiyalarının əldə edilməsidir. Zülallar daha sonra molekulyar çəkilərinə görə ayrılır və nitroselüloz membranına tətbiq olunur. Membranda mövcud olan zülallar radioaktiv etiketli antikorlardan istifadə etməklə müəyyən edilə bilər.

Etiketli antikorları membrana tətbiq etdikdən sonra, xüsusi görüntü prosessorlarından istifadə edərək zülalları aşkar etmək üçün antikorları ehtiva edən hüceyrə rentgen şüasına məruz qalır. Nümunə üzərində zolaqların intensivliyini təhlil edərək, hər bir zülalın konsentrasiyasını müəyyən etmək və nəzarətlə müqayisə etmək olar.

Western blotting ekspress üsuldur