Western Blot -analyysi

Western blot -analyysi on tekniikka, jolla havaitaan tiettyjen proteiinien esiintyminen biologisista kudos- tai nestenäytteistä. Tämä menetelmä perustuu elektroforeesin käyttämiseen proteiinien erottamiseen niiden molekyylipainon perusteella ja yksittäisten proteiinien havaitsemiseen käyttämällä radioleimattuja vasta-aineita.

Western blot -prosessi alkaa proteiinien erottamisella näytteistä geelielektroforeesitekniikalla. Proteiinit siirretään sitten erityiselle kalvolle, joka voidaan valmistaa erilaisista materiaaleista, kuten nitroselluloosasta, polyvinyylidifluoridista (PVDF) tai nailonista. Tällä kalvolla proteiinit tulevat saataville sitoutumaan vasta-aineisiin.

Seuraavaksi halutuille proteiineille spesifisiä vasta-aineita lisätään kalvoon. Vasta-aineet sitoutuvat proteiineihin kalvolla muodostaen vasta-aine-proteiini-komplekseja. Radioleimattuja sekundaarisia vasta-aineita levitetään sitten kalvolle ja ne sitoutuvat primaarisiin vasta-aineisiin. Toissijaiset vasta-aineet sisältävät radioaktiivisesti merkittyjä isotooppeja, jotka voidaan havaita röntgensäteillä.

Kun kalvo on käsitelty radioaktiivisesti leimatuilla vasta-aineilla, sille tehdään röntgentutkimus. Tämä tekee mahdolliseksi tunnistaa haluttujen proteiinien läsnäolon tai puuttumisen kalvolla. Tuloksia voidaan analysoida ja tulkita erityisillä ohjelmistoilla.

Western blot -menetelmä on tehokas työkalu proteiinien analysointiin biologisista kudos- ja nestenäytteistä. Sitä käytetään laajalti biokemiallisessa ja molekyylitutkimuksessa sekä erilaisten sairauksien diagnosoinnissa.

On myös muita blot-menetelmiä, kuten Southern blot -analyysi DNA-analyysiä varten ja Northern blot -analyysi RNA-analyysiä varten. Western blot on kuitenkin pääasiallinen proteiinianalyysimenetelmä ja sitä käytetään laajasti biologisessa tutkimuksessa.

Western blot -analyysi on menetelmä spesifisten proteiinien tunnistamiseksi ja havaitsemiseksi biologisista kudos- tai nestenäytteistä. Tätä menetelmää käytetään laajalti molekyylibiologiassa ja immunologiassa proteiinien, niiden pitoisuuden ja koon analysoinnissa.

Western Blotting -menettely sisältää useita vaiheita. Ensin näytteen proteiinit erotetaan koon ja varauksen mukaan käyttämällä polyakryyliamidigeelielektroforeesia. Proteiinit siirretään sitten nitroselluloosa- tai PVDF (polyvinyylidifluoridi) -kalvolle. Seuraavaksi tulee estovaihe, jossa kalvoa käsitellään proteiiniliuoksella (yleensä BSA:lla tai maitoproteiinilla), jotta estetään vasta-aineiden epäspesifinen sitoutuminen kalvoon. Sitten kalvoa inkuboidaan kiinnostuksen kohteena olevalle proteiinille spesifisen primaarisen vasta-aineen kanssa. Tätä seuraa inkubointi sekundaarisen vasta-aineen kanssa, joka sisältää radioaktiivisesti leimatun fluoroforin tai entsyymin, joka voi osoittaa halutun proteiinin läsnäolon.

Yksi Western Blot -menetelmän tärkeimmistä eduista on sen korkea herkkyys. Tällä menetelmällä voidaan havaita hyvin pieniä määriä kohdeproteiinia, mikä mahdollistaa sen käytön monenlaisissa tieteellisissä tutkimuksissa ja diagnostisissa toimenpiteissä. Lisäksi Western Blot -menetelmän avulla voit määrittää sekä halutun proteiinin pitoisuuden että koon.

On myös muita menetelmiä, kuten Northern blot -analyysi, jota käytetään RNA:n tunnistamiseen, ja Southern blot -analyysi, jota käytetään DNA:n tunnistamiseen. Western blot on kuitenkin edelleen yleisin menetelmä proteiinien tunnistamisessa.

Yhteenvetona voidaan todeta, että Western Blot -analyysi on tehokas tekniikka proteiinimolekyylien analysointiin ja sitä käytetään laajalti molekyylibiologiassa, biokemiassa ja immunologiassa. Sen avulla voidaan tunnistaa ja mitata kiinnostavan proteiinin pitoisuudet ja koot, ja sen korkea herkkyys tekee siitä välttämättömän työkalun monissa tieteellisissä tutkimuksissa ja diagnostisissa toimenpiteissä.

Western blot (WB, Western Blot) on menetelmä proteiinien analysoimiseksi käyttäen elektroforeesia ja radioaktiivista isotooppileimausta. Tätä menetelmää käytetään laajalti biokemiassa, molekyylibiologiassa, immunologiassa, genetiikassa ja muilla tieteenaloilla, joilla vaaditaan yksityiskohtaista proteiinien analysointia.

Keskeinen vaihe WB:ssä on yksittäisten proteiinifraktioiden hankkiminen elektroforeesilla. Proteiinit erotetaan sitten niiden molekyylipainojen perusteella ja levitetään nitroselluloosakalvolle. Kalvolla olevat proteiinit voidaan tunnistaa käyttämällä radioleimattuja vasta-aineita.

Kun leimattuja vasta-aineita on levitetty kalvolle, vasta-aineita sisältävä solu röntgensätellään proteiinien havaitsemiseksi erityisillä kuvaprosessoreilla. Analysoimalla näytteen vyöhykkeiden intensiteettiä voidaan määrittää kunkin proteiinin pitoisuus ja verrata sitä kontrolliin.

Western blottaus on pikamenetelmä