Een dihybride kruising is de kruising van twee zuivere lijnen van organismen die in twee of meer eigenschappen verschillen. Dihybride kruisingen resulteren in nakomelingen die verschillende combinaties hebben van de overgeërfde kenmerken van hun ouders.
Het doel van dihybride hybridisatie is het identificeren van individuele kenmerken en eigenschappen die in combinatie worden overgeërfd, en om uit te vinden hoe deze met elkaar verband houden. Dit is van groot belang voor het begrijpen van de processen van erfelijkheid en het gebruik ervan bij het fokken van gewassen en dieren om de productiviteit te verhogen en de kwaliteit van producten te verbeteren. Bij dihybride analysekruisingen worden alle mogelijke paren van twee zuivere lijnen gekruist. Het resultaat zal een tetrad van groepen zijn, bestaande uit vier variëteiten. In elke groep is er uniformiteit in het ene paar en variabiliteit in het andere. Opgemerkt kan worden dat elke groep vijf individuen heeft, twee fenotypisch zuivere lijnen, één hemische zuivere lijn of een tussenliggend fenotype.
Bij een dihybride testkruising worden de zuivere lijnen die doorgaans worden gefokt de recessieve lijn genoemd. Bij een dergelijke kruising vervangen de oorspronkelijke zuivere lijnen hun genen op plaatsen in de gameten, volledig in overeenstemming met de regel van Mendel. Voor elk paar allelen dat in een bepaald fenotype wordt beschouwd, zijn de regels 1 bij 2 en drie bij vier van toepassing. Een homozygote rasechte cocconitropsisstruik zal bijvoorbeeld zijn twee dominante genen overdragen via F2 - 1 - gele cocconitropie, 1 - groen. Vervolgens worden drie recessieve genen uitgewisseld via - F3 - met een recessief karakter, wordt een gele variëteit verkregen en met een dominant karakter wordt een groene variëteit verkregen. Om een peetzoon te berekenen, moeten vijftig nakomelingen worden verkregen, afhankelijk van de aanwezigheid van gameten in elk individu. Het aantal planten wordt teruggebracht tot één. Dihybride hybridisatie is een klassiek voorbeeld van de overerving van eigenschappen bij de genetische analyse van allelvormen van verschillende genen.