Northern Blot Analizi

Northern Blot Analizi hüceyrələrdə xüsusi RNT-lərin varlığını və miqdarını təyin etməyə imkan verən gen ifadə üsullarından biridir. Bu üsul 1977-ci ildə hazırlanıb və əvvəllər hüceyrələrdə spesifik DNT-ni aşkar etmək üçün yaradılmış Southern Blot Analysis-in adını daşıyır.

Northern Blotting hüceyrələrdə messenger RNT-nin xüsusi bölgələrini müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Bu üsul maraq doğuran RNT-ni aşkar etmək üçün nəzərdə tutulmuş gen zondunun istifadəsinə əsaslanır. Gen zondu radioaktiv və ya flüoresan markerlə etiketlənmiş qısa bir DNT parçasıdır. Ölçüsü ilə ayrılmış və membrana tətbiq olunan RNT-yə hibridləşdirmək üçün istifadə olunur.

Northern blotunu həyata keçirmək üçün əvvəlcə RNT hüceyrələrdən çıxarılır və agaroz gel elektroforezi ilə ölçülərinə görə ayrılır. Daha sonra RNT membrana köçürülür, burada sabitləşir və gen zondu ilə hibridləşir. Bundan sonra, membran istənilən RNT-nin varlığını göstərən bir siqnalın varlığı üçün yoxlanılır.

Northern blotting, hüceyrə inkişafı və funksiyasının altında yatan gen ifadəsini və molekulyar mexanizmləri öyrənmək üçün vacib bir vasitədir. Bu, müəyyən şərtlərdə hansı genlərin ifadə edildiyini və gen ifadəsindəki dəyişikliklərin müxtəlif xəstəliklərlə necə əlaqəli olduğunu müəyyən etməyə imkan verir.

Nəticə olaraq, Northern blotting gen ifadəsini öyrənmək üçün vacib bir texnikadır və hüceyrə biologiyası, genetika və molekulyar biologiya ilə bağlı geniş spektrli tədqiqatlarda istifadə edilə bilər. Southern blotting və Western blotting kimi digər üsullarla birlikdə gen məhsulları və hüceyrə funksiyaları arasında əlaqə yaratmağa kömək edir ki, bu da bioloji prosesləri daha da anlamaq üçün mühüm addımdır.

Şimal ləkəsi Northern blotting, istənilən RNT-ni aşkar etmək üçün zonddan istifadəyə əsaslanan hüceyrələrdə messenger RNT-nin (mRNT) xüsusi bölgələrini aşkar etmək üçün bir üsuldur. Bu üsul gen ifadəsini təhlil etmək üçün istifadə olunur və Southern blottingə alternativdir.

Northern blot metodunun prinsipi belədir: hüceyrələrdən təcrid olunmuş RNT nümunəsi mRNT-ni məhv edən və yalnız DNT fraqmentlərini qoyan RNase III nukleazı ilə müalicə olunur. Bu DNT fraqmentləri daha sonra mRNT-nin müəyyən bölgələrini tamamlayan oliqonukleotidlər olan zondlarla hibridləşdirilir. Hibridləşmə agaroz geldə baş verir ki, bu da DNT fraqmentlərini onların ölçüsünə görə ayırmağa imkan verir. Hibridləşmədən sonra gel DNT-ni məhv edən qələvi ilə müalicə olunur və yalnız mRNT-yə hibridləşdirilmiş zond qalır. Sonra zond radioaktiv timidin və ya flüoresan boya kimi bir boyadan istifadə edərək görüntülənir.

Southern və Western blotting-dən fərqli olaraq, Northern blotting metodu yalnız zülal deyil, həm də RNT-ni təhlil etməyə imkan verir. Bu, xüsusilə gen ifadəsi tədqiqatları üçün vacibdir, çünki mRNT zülalın xəbərçisidir. Bundan əlavə, Northern blotting tədqiq olunan fraqmentin ölçüsünə daha az həssasdır və bu, mRNT-nin daha uzun bölgələrini təhlil etmək üçün faydalı ola bilər.

Northern blotting toxumalarda, hüceyrə xətlərində və hüceyrə mədəniyyətlərində gen ifadəsini təyin etmək üçün biologiya, genetika və tibbdə geniş istifadə olunur. Xərçəng, diabet, ürək-damar xəstəlikləri və s. kimi müxtəlif xəstəliklərlə əlaqəli genləri müəyyən edə bilər.

Northern blot analizi, həmçinin şimal ləkəsi kimi tanınan, bədən hüceyrələrində RNT messenger matrisində xüsusi yerləri müəyyən etmək üçün bir üsuldur. Bu üsul analiz edilən nümunənin tələb etdiyi RNT-ni aşkar etmək üçün zond adlanan genin tətbiqinə əsaslanır. Digər iki üsulla, əvvəllər qeyd olunan Southern Blot və Western Blot ilə müqayisə etsək, Southern Blot RNT və ya DNT ilə məhdudlaşmaqdansa, istənilən növ zülalların təhlilinə imkan verən daha ümumi bir üsuldur. Digər tərəfdən, Western blotting zülalları ayırmaq üçün nəzərdə tutulub, Northern Blotting isə RNT-ni təhlil etmək üçün nəzərdə tutulub