Northern Blot -analyysi

Northern blot -analyysi on yksi geeniekspressiomenetelmistä, jonka avulla voit määrittää spesifisten RNA:iden läsnäolon ja määrän soluissa. Tämä menetelmä kehitettiin vuonna 1977, ja se on nimetty Southern Blot -analyysin mukaan, joka on aiemmin kehitetty havaitsemaan spesifinen DNA soluissa.

Northern Blotting -menetelmää käytetään identifioimaan tiettyjä lähetti-RNA:n alueita soluissa. Tämä menetelmä perustuu geenikoettimen käyttöön, joka on suunniteltu havaitsemaan kiinnostava RNA. Geenikoetin on lyhyt DNA-pala, joka on leimattu radioaktiivisella tai fluoresoivalla markkerilla. Sitä käytetään hybridisoitumaan RNA:han, joka on erotettu koon mukaan ja levitetty kalvolle.

Northern-blottauksen suorittamiseksi RNA uutetaan ensin soluista ja erotetaan koon mukaan agaroosigeelielektroforeesilla. RNA siirretään sitten kalvolle, jossa se kiinnitetään ja hybridisoidaan geenikoettimen kanssa. Tämän jälkeen kalvo tutkitaan halutun RNA:n läsnäolon osoittavan signaalin havaitsemiseksi.

Northern blot on tärkeä työkalu tutkittaessa geenien ilmentymistä ja solujen kehityksen ja toiminnan taustalla olevia molekyylimekanismeja. Sen avulla voimme määrittää, mitkä geenit ilmentyvät tietyissä olosuhteissa ja kuinka muutokset geenien ilmentymisessä liittyvät erilaisiin sairauksiin.

Yhteenvetona voidaan todeta, että Northern blotting on tärkeä tekniikka geenin ilmentymisen tutkimisessa ja sitä voidaan käyttää monissa solubiologiaan, genetiikkaan ja molekyylibiologiaan liittyvissä tutkimuksissa. Yhdessä muiden tekniikoiden, kuten Southern blottingin ja Western blottingin, kanssa se auttaa määrittämään geenituotteiden ja solutoimintojen välisen suhteen, mikä on tärkeä askel biologisten prosessien ymmärtämisessä.

Northern blottaus Northern blot -menetelmä on lähetti-RNA:n (mRNA) spesifisten alueiden havaitsemiseen soluissa, joka perustuu koettimen käyttöön halutun RNA:n havaitsemiseksi. Tätä menetelmää käytetään geeniekspression analysointiin ja se on vaihtoehto Southern blot -menetelmälle.

Northern blot -menetelmän periaate on seuraava: soluista eristettyä RNA:ta käsitellään nukleaasi RNaasi III:lla, joka tuhoaa mRNA:n ja jättää vain DNA-fragmentteja. Nämä DNA-fragmentit hybridisoidaan sitten koettimiin, jotka ovat oligonukleotideja, jotka ovat komplementaarisia mRNA:n tietyille alueille. Hybridisaatio tapahtuu agaroosigeelissä, mikä mahdollistaa DNA-fragmenttien erottamisen niiden koon mukaan. Hybridisaation jälkeen geeliä käsitellään alkalilla, joka tuhoaa DNA:n jättäen jäljelle vain koettimen, joka on hybridisoitunut mRNA:han. Sitten koetin visualisoidaan käyttämällä väriainetta, kuten radioaktiivista tymidiiniä tai fluoresoivaa väriainetta.

Toisin kuin Southern- ja Western blotting, Northern blotting -menetelmän avulla voit analysoida paitsi proteiinia myös RNA:ta. Tämä on erityisen tärkeää geeniekspressiotutkimuksissa, koska mRNA on proteiinin esiaste. Lisäksi Northern blotting on vähemmän herkkä tutkittavan fragmentin koolle, mikä voi olla hyödyllistä mRNA:n pidempien alueiden analysoinnissa.

Northern blottausta käytetään laajalti biologiassa, genetiikassa ja lääketieteessä geenien ilmentymisen määrittämiseen kudoksissa, solulinjoissa ja soluviljelmissä. Se voi tunnistaa geenejä, jotka liittyvät erilaisiin sairauksiin, kuten syöpään, diabetekseen, sydän- ja verisuonisairauksiin jne.

Northern blot -analyysi, joka tunnetaan myös nimellä Northern blot, on menetelmä tiettyjen kohtien tunnistamiseksi kehon solujen RNA:n lähettimatriisista. Tämä menetelmä perustuu geenin, jota kutsutaan koettimeksi, lisäämiseen analysoitavan näytteen vaatiman RNA:n havaitsemiseksi. Verrattaessa kahteen muuhun menetelmään, Southern Blot ja Western Blot, jotka mainittiin aiemmin, Southern Blot on yleisempi menetelmä, joka sallii minkä tahansa tyyppisten proteiinien analysoinnin sen sijaan, että se rajoittuisi RNA:han tai DNA:han. Toisaalta Western blotting on suunniteltu erottamaan proteiineja, kun taas Northern Blotting on suunniteltu analysoimaan RNA:ta.