Нозерн-Блотінг (Northern Blot Analysis)

Нозерн-Блотінг (Northern Blot Analysis) є одним із методів генної експресії, що дозволяє визначити наявність та кількість конкретних РНК у клітинах. Цей метод був розроблений у 1977 році та отримав свою назву на честь південної гібридизації (Southern Blot Analysis), який був розроблений раніше для виявлення певних ДНК у клітинах.

Нозерн-Блоттінг використовується для визначення специфічних ділянок інформаційної (матричної) РНК у клітинах. Цей метод заснований на використанні генного зонда, призначеного для виявлення шуканої РНК. Генний зонд – це короткий фрагмент ДНК, мічений радіоактивним чи флуоресцентним маркером. Він використовується для гібридизації з РНК, яка була розділена за розміром та нанесена на мембрану.

Для проведення нозерн-блот, спочатку вилучають РНК з клітин і поділяють її за розміром за допомогою електрофорезу в агарозному гелі. Потім РНК переносять на мембрану, де вона фіксується і гібридизується з генним зондом. Після цього мембрана вивчається на наявність сигналу, що вказує на присутність шуканої РНК.

Нозерн-блот є важливим інструментом для дослідження генної експресії та молекулярних механізмів, що лежать в основі розвитку та функціонування клітин. Він дозволяє встановити, які гени експресуються в певних умовах і як зміни генної експресії пов'язані з різними захворюваннями.

На закінчення, нозерн-блот є важливим методом для вивчення генної експресії і може бути використаний у широкому спектрі досліджень, пов'язаних з клітинною біологією, генетикою та молекулярною біологією. Разом з іншими методами, такими як саузерн-блот і вестерн-блот, він допомагає встановити співвідношення між генними продуктами і функціями клітин, що є важливим кроком для подальшого розуміння біологічних процесів.

Нозерн-Блоттінг (Northern blotting) є методом визначення специфічних ділянок матричної РНК (мРНК) у клітинах, який ґрунтується на використанні зонда для виявлення шуканої РНК. Цей метод використовується для аналізу експресії генів і є альтернативою методу Саузерн-Блоттінг (Southern blotting).

Принцип методу Нозерн-блот полягає в наступному: зразок РНК, виділений з клітин, обробляється нуклеазою РНКазою III, яка руйнує мРНК і залишає тільки фрагменти ДНК. Потім ці фрагменти ДНК гібридизуються з зондами, які є олігонуклеотидами, комплементарні певним ділянкам мРНК. Гібридизація відбувається в гелі з агарозою, що дозволяє розділяти фрагменти ДНК за їх розміром. Після гібридизації гель обробляють лугом, що руйнує ДНК, залишаючи тільки зонд, який був гібридизований з мРНК. Потім зонд візуалізується за допомогою барвника, такого як радіоактивний тимідин або флуоресцентний барвник.

На відміну від Саузерн-і Вестерн-Блоттінг, метод Нозерн-Блоттінг дозволяє аналізувати не тільки білок, але і РНК. Це особливо важливо на дослідження експресії генів, оскільки мРНК є попередником білка. Крім того, метод Нозерн-Блоттинг менш чутливий до розміру досліджуваного фрагмента, що може бути корисно для аналізу більш довгих ділянок мРНК.

Метод Нозерн-Блоттінг широко використовується в біології, генетиці та медицині для визначення експресії генів у тканинах, клітинних лініях і культурах клітин. Він дозволяє виявляти гени, пов'язані з різними захворюваннями, такими як рак, діабет, серцево-судинні захворювання та ін.

Нозерн блотт аналіз, також відомий як північний блот, є методом для визначення конкретних ділянок в інформаційній (матриці) рНК в клітинах організму. Цей метод заснований на введенні гена, званого зондом, для виявлення РНК, яка потрібна зразку, що аналізується. Щоб порівняти з двома іншими методами, саузерн блот і вестерн бло ттнг, згаданими раніше, зауважимо, що Саузерн Блот є більш загальним методом, який дозволяє аналізувати білки будь-якого типу, замість того, щоб обмежуватися РНК або ДНК. З іншого боку, західний блоттинговий метод призначений для поділу білків, тоді як Нозерн Блантинг призначений для аналізу РНК