Southern Blot Analizi

Southern blot analizi hüceyrələrdə DNT-nin xüsusi formalarını müəyyən etmək üçün bir üsuldur. 1975-ci ildə İngilis bioloqu Edvin Southern tərəfindən hazırlanmışdır.

Bu üsulda DNT molekulları əvvəlcə hüceyrələrdən çıxarılır və sonra məhdudlaşdırıcı endonükleazlardan istifadə etməklə kiçik parçalara kəsilir. Bu DNT fraqmentləri agaroz gel elektroforezi ilə ayrılır.

Sonra DNT fraqmentləri kapilyar blotting istifadə edərək membrana köçürülür. Daha sonra sınaqdan keçirilən DNT ardıcıllığını tamamlayan radioetiketli və ya floresan boya ilə işarələnmiş DNT zondundan istifadə edilir. Bu zond membrandakı tamamlayıcı DNT fraqmentləri ilə hibridləşir.

Hibridləşmədən sonra probun membrandakı mövqeyi avtoradioqrafiya və ya flüoresansla müəyyən edilir ki, bu da ayrılmış fraqmentlər arasında istənilən DNT ardıcıllığını müəyyən etməyə imkan verir.

Beləliklə, Southern blotting, öyrənilən hüceyrələrin və ya toxumaların genomunda xüsusi DNT ardıcıllığının mövcudluğunu aşkar etməyə imkan verir.

Müqayisə üçün, RNT (Şimal blotlama) və zülalları (Western blotting) müəyyən etmək üçün oxşar üsullar var.

Southern Blot Analizi hüceyrələrdə xüsusi DNT formalarını aşkar etmək üçün istifadə edilən bir üsuldur. Bu üsul 1975-ci ildə Edward Southern tərəfindən hazırlanmışdır və o vaxtdan molekulyar biologiyada ən çox istifadə edilən metodlardan birinə çevrilmişdir.

Metodun prinsipi ondan ibarətdir ki, DNT molekulları hüceyrələrdən çıxarılır və məhdudlaşdırıcı fermentlər vasitəsilə çoxlu kiçik parçalara kəsilir. Sonra bu fraqmentlər agaroz gel elektroforezindən istifadə edərək ölçülərinə görə ayrılır. Yaranan DNT fraqmentləri nitroselüloza və ya digər membrana köçürülür, daha sonra xüsusi gen zondla müalicə olunur. Bir gen zondu xüsusi olaraq DNT-nin müəyyən bir bölgəsinə bağlanan qısa bir nukleotid ardıcıllığıdır. Membran gen zondu ilə hibridləşdirildikdən sonra hibridləşməmiş hər hansı qalan zond çıxarılır və membranda yalnız hibridləşdirilmiş DNT fraqmentləri qalır.

Avtoradioqrafiya və ya flüoresan mikroskopiya membranda müəyyən bir DNT formasının mövcudluğunu müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Avtoradioqrafiya vəziyyətində, membran bir fotoemulsiya təbəqəsi ilə örtülmüşdür, sonra filmə məruz qalır. Flüoresan mikroskopiya vəziyyətində, hibridləşdirilmiş DNT fraqmentlərinə bağlanan membrana xüsusi flüoresan etiketlər tətbiq olunur.

Bu üsul digər üsullarla müqayisədə bir sıra üstünlüklərə malikdir, məsələn, Northern blotting və Western blotting. Məsələn, Southern blotting istifadə edərək, bir orqanizmin genomunda DNT-nin xüsusi formalarının mövcudluğunu, habelə onların mövqeyini və miqdarını təyin edə bilərsiniz. Bundan əlavə, bu üsul DNT-nin genom ölçüsünü, gen strukturunu və bir çox digər xüsusiyyətlərini müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər.

Sonda qeyd edək ki, Southern blotting DNT-nin öyrənilməsi üçün güclü texnikadır və molekulyar biologiyanın bir çox sahələrində, o cümlədən genetika, immunologiya, onkologiya və başqalarında istifadə edilə bilər.

Southern blot analizi hüceyrələrdə DNT-nin spesifik formalarını müəyyən etmək üçün bir üsuldur və genetik variasiyaları təhlil etmək üçün molekulyar biologiyada istifadə olunur. O, məhdudlaşdırıcı fermentlərdən istifadə etməklə DNT molekullarının fraqmentlərə ayrılmasına və sonradan zonddan istifadə edərək eyni bölmələrin aşkarlanmasına əsaslanır.

Southern blotunu həyata keçirmək üçün hüceyrələr əvvəlcə parçalanır və DNT hüceyrə komponentlərindən ayrılır. Daha sonra DNT məhdudlaşdırıcı fermentlərdən istifadə edərək fraqmentlərə ayrılır. DNT fraqmentləri zond üçün daşıyıcı kimi xidmət edən nitroselüloz membrana köçürülür. Zond radioaktiv, flüoresan və ya biotin etiketli ola bilər və xüsusi ardıcıllıqları olan DNT-yə bağlanır.

Bundan sonra, membran əvvəllər tətbiq edilmiş DNT fraqmentləri olan bir gelə köçürülür. DNT fraqmentləri ölçülərinə görə gel üzərində ayrılır və zondla bağlanmış DNT fraqmentlərinə uyğun lentlər boyanma yolu ilə aşkar edilir.

Southern blotting mutasiyalar, polimorfizmlər və gücləndirmələr kimi genetik dəyişiklikləri aşkar etmək üçün istifadə olunur. O, həmçinin müxtəlif toxumalarda və müxtəlif stimullara cavab olaraq gen ifadəsini təyin etmək üçün istifadə edilə bilər.

Digər blotlama üsullarından (məsələn, Şimal və Qərb blotlama) fərqli olaraq, Southern blotting yüksək spesifikliyə və həssaslığa malikdir və kiçik miqdarda DNT-ni təhlil etmək üçün istifadə edilə bilər. Bu, onu insan genetikasının, tibbi genetikanın və DNT-nin öyrənilməsini əhatə edən digər elm sahələrinin öyrənilməsi üçün faydalı alətə çevirir.