Próba piramidy

Pomimo tego, że testy amidopirynowy stosowane są jedynie w praktyce mikrobiologicznej do różnicowania niektórych typów bakterii, istnieją inne, prostsze i mniej pracochłonne metody, które można w tym celu zastosować. Jedną z takich metod jest test piramidonowy lub pirydoksynowy. Technika ta jest bardzo prosta, a składniki do niej można znaleźć w wielu aptekach i sklepach chemicznych.

1. Zasada metody Testy na piramidon lub piryton opierają się na różnym działaniu piramidonu (piromidonu) i tyroksyny (tirokseen) na paciorkowce grupy A. Streptococcus dzieli się na dwie główne grupy, z których jedna obejmuje S. pyogenes, druga - S. faecalis. Organizmy te wykazują podobną aktywność metaboliczną. W obecności jodu tyroksyna i jod zabijają bakterie z grupy A. Jod jest składnikiem odżywczym, natomiast tyroksyna wytwarzana przez różne bakterie może zastąpić jod. W efekcie giną bakterie, w tym szczepy oporne na jod. Piramidon natomiast jest enzymem zdolnym do hydrolizy różnych substancji, w tym tyroksyny i jej produktów przemiany materii. Nie ma zdolności hamowania metabolizmu bakterii. Jeśli strzałki świecą jaśniej w obecności Pyramidonu, oznacza to, że należą one do paciorkowców grupy A. Są to zatem dwa enzymy, z których jeden ma właściwości hamujące metabolizm bakterii typu A, a drugi rozkłada i wykorzystuje te biomolekuły. Ponieważ enzymy użyte w tym teście są całkowicie specyficzne dla konkretnego gatunku mikroflory, wyniki są wiarygodne i praktycznie nie dają wyników fałszywie dodatnich.

Test piramidonowy (lub test piramidonowy, test amidopirynowy) jest odczynnikiem w mikrobiologii służącym do identyfikacji bakterii na podstawie zdolności do zmiany koloru ich kolonii po dodaniu kryształów odczynnika amidopirynowego. Test został opracowany w 1913 roku przez Georga Grundmanna.

*Kwas butanodiowy (kwas masłowy) i piramidon (sól kwasu benzoesowego)* tworzą żółty pigment, a brak reakcji uważa się za negatywny wynik testu. Obecność pigmentu jest pozytywnym wynikiem testu. Podczas mieszania brzeczki z wodą z dodatkiem amidopiryny i czerwonego barwnika - soli tetrazoliowej (kwasu p-fenylenodiaminosulfonowego) zmienia się barwa kolonii w wyniku powstania dużej ilości nieenzymatycznego produktu wtórnego (kwasu mlekowego i żółte osady), co powoduje, że barwa podłoża staje się intensywniej żółta, bardzo szybko usuwając czarne tło. Zmiana koloru kolonii wskazuje na obecność żywotnych dehydrogenaz bakteryjnych.