Αντίδραση Feulgen

Η αντίδραση Feulgen είναι μια μέθοδος για τον προσδιορισμό της παρουσίας DNA στον πυρήνα του κυττάρου, η οποία αναπτύχθηκε το 1924 από τον Γερμανό βιολόγο Robert Feulgen. Αυτή η μέθοδος είναι ένας από τους πιο συνηθισμένους και ακριβείς τρόπους προσδιορισμού της παρουσίας DNA στα κύτταρα.

Η διαδικασία αντίδρασης Feulgen ξεκινά με την παρασκευή ενός τμήματος ιστού, το οποίο στη συνέχεια υδρολύεται με αραιό υδροχλωρικό οξύ. Αυτό οδηγεί σε μετουσίωση πρωτεΐνης και υδρόλυση DNA στον πυρήνα του κυττάρου. Το τμήμα στη συνέχεια υποβάλλεται σε επεξεργασία με αντιδραστήριο Schiff, το οποίο αλληλεπιδρά με τα δεοξυριβονουκλεοτίδια που παραμένουν στον πυρήνα του κυττάρου, σχηματίζοντας ένα σταθερό σύμπλοκο.

Ως αποτέλεσμα αυτής της αντίδρασης, τα δεοξυριβονουκλεοτίδια στον πυρήνα του κυττάρου αποκτούν βαθύ μωβ χρώμα. Ταυτόχρονα, το χρώμα του λεκέ εξαρτάται από την ποσότητα του DNA στο κύτταρο.

Η αντίδραση Feulgen έχει πολλές εφαρμογές στη βιολογική έρευνα. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε DNA διαφόρων τύπων κυττάρων, καθώς και για τη μελέτη των χαρακτηριστικών του κυτταρικού κύκλου και των μεταλλάξεων του DNA.

Επιπλέον, η μέθοδος αντίδρασης Feulgen είναι ένα σημαντικό εργαλείο για τη διάγνωση ασθενειών που σχετίζονται με διαταραχές του DNA, όπως ο καρκίνος και οι γενετικές διαταραχές.

Έτσι, η αντίδραση Feulgen είναι μια σημαντική μέθοδος στη βιολογική έρευνα, η οποία επιτρέπει σε κάποιον να προσδιορίσει την παρουσία του DNA στα κύτταρα και να χρησιμοποιήσει αυτές τις πληροφορίες για τη διάγνωση και τη μελέτη ασθενειών.

Η Αντίδραση Feulgen είναι μια από τις πιο κοινές μεθόδους για τον προσδιορισμό της παρουσίας DNA στα κύτταρα. Η μέθοδος αναπτύχθηκε από τον Γερμανό βιολόγο Robert Feulgen το 1914 και παραμένει ένα σημαντικό εργαλείο για την έρευνα της κυτταρικής βιολογίας.

Η βασική ιδέα της αντίδρασης Feulgen είναι η χρήση του αντιδραστηρίου του Schiff για τη χρώση του DNA στον πυρήνα του κυττάρου. Για να γίνει αυτό, πριν ξεκινήσει το πείραμα, ο ιστός κόβεται και υποβάλλεται σε υδρόλυση με αραιό υδροχλωρικό οξύ. Αυτό το βήμα είναι απαραίτητο για την αφαίρεση βασικών πρωτεϊνικών συστατικών που μπορεί να παρεμβαίνουν στην ανίχνευση του DNA.

Στη συνέχεια, το ύφασμα υποβάλλεται σε επεξεργασία με αντιδραστήριο Schiff, το οποίο περιέχει φούξινη ή τα παράγωγά της. Παρουσία DNA, το αντιδραστήριο του Schiff σχηματίζει ένα σταθερό σύμπλοκο με νηματοειδή μόρια DNA, το οποίο τελικά καταλήγει στο σχηματισμό ενός μωβ χρώματος.

Ο βαθμός χρώματος εξαρτάται από την ποσότητα του DNA στο κύτταρο, γεγονός που καθιστά την αντίδραση Feulgen ευαίσθητη και ακριβή και επιτρέπει τη χρήση της για ποσοτική ανάλυση DNA.

Η αντίδραση Feulgen χρησιμοποιείται ευρέως στην ιατρική, τη βιολογία και τη γενετική για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε DNA σε διάφορους τύπους κυττάρων. Αυτή η μέθοδος μπορεί να χρησιμοποιηθεί, για παράδειγμα, για τη μελέτη κακοήθων όγκων, όπου οι αλλαγές στην ποσότητα του DNA μπορεί να υποδηλώνουν την παρουσία καρκινικών κυττάρων. Μπορεί επίσης να είναι χρήσιμο για τη μελέτη του γονιδιώματος διαφόρων οργανισμών και την ανίχνευση μεταλλάξεων και γενετικών αλλαγών.

Έτσι, η αντίδραση Feulgen είναι ένα σημαντικό εργαλείο για τη μελέτη της κυτταρικής βιολογίας και γενετικής, που επιτρέπει σε κάποιον να προσδιορίσει την παρουσία και την ποσότητα του DNA σε ένα κύτταρο. Λόγω της ευαισθησίας και της ακρίβειάς της, αυτή η μέθοδος εξακολουθεί να είναι δημοφιλής μεταξύ των ερευνητών σε όλο τον κόσμο.

Αντίδραση Feulgen για τον προσδιορισμό του DNA στα κύτταρα. Η ουσία Fölgegens είναι ένα διάλυμα που αποτελείται από πολλά συστατικά. Ο απώτερος στόχος είναι η ανίχνευση και η μέτρηση της ποσότητας του DNA στον ιστό. Η βασική μέθοδος για την προετοιμασία των κυττάρων βασίζεται στη διαδικασία στερέωσης που περιγράφεται στην ενότητα 3.3.1.

Όταν ένα δείγμα ιστού ανοίγεται και αραιώνεται με μεγάλη ποσότητα οξέος, διασπά το κολλαγόνο που υπάρχει στη μήτρα του ιστού για να απελευθερώσει κύτταρα που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για ανάλυση. Ορισμένες μελέτες αξιολογούν τη σταθεροποίηση των ιστών χρησιμοποιώντας οπτική μικροσκοπία, άλλες αξιολογούν την παρουσία βιωσιμότητας των κυττάρων στο υλικό μετά τη σταθεροποίηση του φαρμάκου. Τέλος, στην περίπτωση της κρυοϊστολογίας, τα κύτταρα στερεώνονται υπό υποπυρηνικές συνθήκες όπως η σάρωση κατάψυξης.

Μετά τη στερέωση, τα μη σταθεροποιημένα κύτταρα χρωματίζονται με όξινα απορρυπαντικά αντιδραστήρια Schiff. Η χρώση με ιώδιο ή μπλε τολουϊδίνη μπορεί να συνοδεύει την αντίδραση Föhl