Absorpcja fotometryczna

Fotometria absorpcyjna: pomiar absorpcji światła przez obiekty

Fotometria absorpcyjna (lub spektrofotometria) to metoda analizy oparta na pomiarze absorpcji światła przez obiekt. Znajduje szerokie zastosowanie w praktyce laboratoryjnej, w szczególności do analizy ilościowej substancji biologicznie czynnych.

Istota metody polega na tym, że światło przechodzi przez roztwór lub inny analizowany obiekt, a jego natężenie mierzy się przed i po przejściu przez ten obiekt. Różnica pomiędzy pomiarami wynika z faktu, że obiekt pochłania część światła, a reszta przechodzi przez niego i dociera do detektora.

Do pomiaru absorpcji światła wykorzystuje się spektrofotometr – urządzenie mierzące światło przechodzące przez analizowany obiekt przy różnych długościach fal. Dzięki temu możemy uzyskać widmo absorpcyjne obiektu, tj. zależność stopnia absorpcji światła od długości fali.

Fotometria absorpcyjna jest jedną z najdokładniejszych metod analizy ilościowej substancji biologicznie czynnych, na przykład białek, kwasów nukleinowych, enzymów i innych cząsteczek organicznych. Jest również szeroko stosowany w analizie wody i innych cieczy, w tym leków.

Ponadto fotometrię absorpcyjną można zastosować do pomiaru stężenia substancji w roztworze, a także do określenia parametrów kinetycznych reakcji, takich jak szybkość reakcji i stała szybkości.

Podsumowując, fotometria absorpcyjna jest ważną metodą analizy, która dostarcza informacji o właściwościach obiektu na podstawie jego widma absorpcji światła. Znajduje szerokie zastosowanie w praktyce laboratoryjnej i pomaga w rozwiązywaniu wielu problemów z zakresu biologii, chemii i farmakologii.

Fotometria to zespół metod i przyrządów służących do pomiaru parametrów świetlnych i energetycznych promieniowania optycznego, a także obrazów obiektów w świetle monochromatycznym lub białym. Proces odbywa się przy użyciu specjalnych urządzeń fotometrycznych. Niektóre rodzaje fotometrii zyskują własną nazwę i sformułowanie, na przykład spektrofotometria, pirometria, materiałoznawstwo fotograficzne.

Fotometria absorpcyjna – F. (od łac. absorbere – absorbować), polega na rejestrowaniu absorpcji światła przez badaną substancję. Służy do pomiaru współczynników absorpcji światła LCS i współczynników ekstynkcji rozcieńczonych roztworów. W widmie optycznym odczyty fotometru są proporcjonalne do wartości Dl, zdefiniowanej jako różnica pomiędzy wartościami Dl w absorbującym i nieabsorbującym obszarze widma. Zwykle odstęp ten jest ustalany symetrycznie po obu stronach maksymalnej emisji roztworu w obszarze długości fali, w którym nie ma pasm absorpcyjnych. Konwencjonalne fotometry pozwalają na rejestrację tylko jednej z postaci widm - krzywych absorpcji światła (LAC), które reprezentują zależność logI=f(λ). Mogą wyglądać jak linia (światło monochromatyczne), poszerzony pik lub kilka poszerzonych pików. Pasmo absorpcji charakteryzuje się położeniem maksimum na skali długości fali λm i głębokością p oraz charakteryzuje się szerokością Δλ.

Znajduje zastosowanie w różnych dziedzinach nauki, technologii i przemysłu, zwłaszcza w chemii, fizyce i biologii. Fotometry absorpcyjne stosowane są w medycynie do oznaczania zawartości hemoglobiny i czerwonych krwinek we krwi, do oznaczania ilości białek w materiale biologicznym. Fotometrię absorpcyjną stosuje się w sprzęcie laboratoryjnym, takim jak spektrofotometry i fotoelektrokolorymetry.