Ninhydrinová reakce

**Ninhydrinová reakce (HNR)** je metoda pro stanovení přítomnosti nebo nepřítomnosti primární nebo sekundární amidové vazby v proteinech a jiných organických sloučeninách. Reakce je založena na schopnosti ninhydrinu, oxidované formy aminoxidu N-chlorsukcinimidu (NCS), vytvářet barevné komplexy s aminokyselinami a jejich deriváty. Pokud jsou aminoskupiny přítomny v molekule proteinu nebo jiné organické sloučeniny, budou kondenzovat s ninhydrinem a vytvoří barevnou sloučeninu s určitým odstínem. Proto se ninhydrinová reakce používá ke stanovení strukturních vlastností proteinů a k analýze dynamiky a čistoty činidel v biologických systémech.

K provedení ninhydrinové reakce je třeba dodržet následující kroky:

1. Připravte roztok ninhydrinu a přidejte jej ke zkušebnímu vzorku. 2. Obsah roztoku po určitou dobu míchejte. 3. Směs nechte několik hodin nebo dní - záleží na konkrétním návodu. 4. Vyhodnoťte výslednou barvu roztoku a porovnejte ji s typickým vzorem na vzorcích, kde je přítomna nebo chybí aminoskupina. Výhody použití ninhydrinové metody oproti jiným metodám založeným na detekci zbytkové kyselosti (například metoda Sholl) jsou následující:

- Eutrofizace většiny vzorků ve většině případů neumožňuje jejich optické vyšetření ani při delší době ponoření do rozpouštědla. Pomocí ninhydrogenové metody se můžete vyhnout problémům spojeným s ředěním a paralelním okyselením roztoku před provedením studie. - Výsledkem spektrofotometrických výzkumných metod je pouze měření zbytkových kyselin. Informace o přítomnosti amidů se tedy získává nepřímo a takto získaná hodnota nemusí přímo korelovat s množstvím detekovaných amidů. Tato nevýhoda je více charakteristická pro standardní metodu, Shollovu metodu, než pro ninhydrogenovou reakci, která má jasnou výhodu při studiu vzorků s vysokým obsahem zbytkových produktů obsahujících dusík. Právě výsledek získaný s ninhydrenem dává specialistovi představu buď o tom, jak kvalitní produkt obdržel (a následně zvýší teplotu hydrolýzy), nebo že jeho výsledný produkt neobsahuje amidy a tudíž potřebují objasnění. Některé soli obsahující amidové skupiny, například cyklohexanol indoxyl sodný, mají dostatečnou nativní absorpci v ultrafialové oblasti při vlnových délkách od 208 do 270 nm. Dostatečně přesné kvantitativní výsledky na takových skupinách lze získat vysokorozlišovací absorpcí resp