Ninhydriinireaktio

**Ninhydriinireaktio (HNR)** on menetelmä primaarisen tai sekundaarisen amidisidoksen läsnäolon tai puuttumisen määrittämiseksi proteiineissa ja muissa orgaanisissa yhdisteissä. Reaktio perustuu amiinioksidin N-kloorisukkiini-imidin (NCS) hapettuneen muodon, ninhydriinin kykyyn muodostaa värillisiä komplekseja aminohappojen ja niiden johdannaisten kanssa. Jos proteiinin tai muun orgaanisen yhdisteen molekyylissä on aminoryhmiä, ne kondensoituvat ninhydriinin kanssa muodostaen värillisen yhdisteen, jolla on tietty sävy. Siksi ninhydriinireaktiota käytetään määrittämään proteiinien rakenteellisia ominaisuuksia ja analysoimaan reagenssien dynamiikkaa ja puhtautta biologisissa järjestelmissä.

Ninhydriinireaktion suorittamiseksi on noudatettava seuraavia vaiheita:

1. Valmista ninhydriiniliuos ja lisää se testinäytteeseen. 2. Sekoita liuoksen sisältöä tietyn ajan. 3. Anna seoksen vaikuttaa useita tunteja tai päiviä - se riippuu erityisistä ohjeista. 4. Arvioi tuloksena saatu liuoksen väri ja vertaa sitä tyypilliseen kuvioon näytteissä, joissa aminoryhmä on läsnä tai puuttuu. Ninhydriinimenetelmän käytön edut muihin jäännöshappoisuuden havaitsemiseen perustuviin menetelmiin (esimerkiksi Sholl-menetelmään) verrattuna ovat seuraavat:

- Useimpien näytteiden rehevöityminen ei useimmissa tapauksissa mahdollista niiden optista tutkimista, vaikka liuottimeen upotetaan pidempiä aikoja. Käyttämällä ninvetymenetelmää voit välttää liuoksen laimentamiseen ja rinnakkaiseen happamoitumiseen liittyvät ongelmat ennen tutkimuksen suorittamista. - Spektrofotometristen tutkimusmenetelmien tulos on vain jäännöshappojen mittaus. Siten tietoa amidien läsnäolosta saadaan epäsuorasti, eikä näin saatu arvo välttämättä korreloi suoraan havaittujen amidien määrän kanssa. Tämä haitta on enemmän tyypillinen standardimenetelmälle, Sholl-menetelmälle, kuin ninvetyreaktiolle, jolla on selvä etu tutkittaessa näytteitä, joissa on runsaasti jäännöstyppeä sisältäviä tuotteita. Juuri ninhydreenillä saatu tulos antaa asiantuntijalle käsityksen joko siitä, kuinka laadukkaan tuotteen hän on saanut (ja sitten hän nostaa hydrolyysilämpötilaa), tai siitä, että hänen tuloksena oleva tuote ei sisällä amideja eikä siksi ole kaipaa selvennystä. Joillakin amidiryhmiä sisältävillä suoloilla, esimerkiksi natriumsykloheksanoli-indoksyylillä, on riittävä natiivi absorptio ultraviolettialueella aallonpituuksilla 208 - 270 nm. Riittävän tarkkoja kvantitatiivisia tuloksia tällaisista ryhmistä voidaan saada korkearesoluutioisella absorptiolla tai