Phản ứng Ninhydrin

**Phản ứng ninhydrin (HNR)** là phương pháp xác định sự hiện diện hay vắng mặt của liên kết amit sơ cấp hoặc thứ cấp trong protein và các hợp chất hữu cơ khác. Phản ứng dựa trên khả năng ninhydrin, một dạng oxy hóa của oxit amin N-chlorosuccinimide (NCS), tạo thành các phức chất có màu với axit amin và các dẫn xuất của chúng. Nếu các nhóm amino có mặt trong phân tử protein hoặc hợp chất hữu cơ khác, chúng sẽ ngưng tụ với ninhydrin, tạo thành hợp chất có màu với độ bóng nhất định. Do đó, phản ứng ninhydrin được sử dụng để xác định đặc điểm cấu trúc của protein và phân tích động lực học cũng như độ tinh khiết của thuốc thử trong các hệ thống sinh học.

Để thực hiện phản ứng ninhydrin, phải thực hiện các bước sau:

1. Chuẩn bị dung dịch ninhydrin và thêm vào mẫu thử. 2. Khuấy lượng dung dịch trong một thời gian nhất định. 3. Để hỗn hợp trong vài giờ hoặc vài ngày - tùy thuộc vào hướng dẫn cụ thể. 4. Đánh giá màu thu được của dung dịch và so sánh nó với mẫu điển hình trên các mẫu có hoặc không có nhóm amino. Ưu điểm của việc sử dụng phương pháp ninhydrin so với các phương pháp khác dựa trên việc phát hiện độ axit dư (ví dụ, phương pháp Sholl) như sau:

- Sự phú dưỡng của hầu hết các mẫu trong hầu hết các trường hợp không cho phép kiểm tra chúng bằng phương pháp quang học, ngay cả khi ngâm trong dung môi lâu hơn. Sử dụng phương pháp ninhyđrô, bạn có thể tránh được các vấn đề liên quan đến pha loãng và axit hóa song song dung dịch trước khi tiến hành nghiên cứu. - Kết quả của phương pháp nghiên cứu quang phổ chỉ là phép đo lượng axit dư. Do đó, thông tin về sự hiện diện của amit được thu thập một cách gián tiếp và giá trị thu được có thể không tương quan trực tiếp với lượng amit được phát hiện. Nhược điểm này đặc trưng hơn của phương pháp tiêu chuẩn, phương pháp Sholl, so với phản ứng ninhđrô, có lợi thế rõ ràng khi nghiên cứu các mẫu có hàm lượng cao các sản phẩm chứa nitơ dư. Kết quả thu được với ninhydrene giúp chuyên gia biết được sản phẩm mà anh ta nhận được có chất lượng cao như thế nào (và sau đó anh ta sẽ tăng nhiệt độ thủy phân) hoặc sản phẩm thu được của anh ta không chứa amit và do đó không cần làm rõ. Một số muối chứa nhóm amit, ví dụ, natri cyclohexanol indoxyl, có khả năng hấp thụ tự nhiên đủ ở vùng tia cực tím ở bước sóng từ 208 đến 270 nm. Kết quả định lượng đủ chính xác trên các nhóm như vậy có thể thu được bằng cách hấp thụ độ phân giải cao hoặc