Reakcja na Ninhydrynę

**Reakcja ninhydrynowa (HNR)** to metoda oznaczania obecności lub braku pierwszorzędowego lub drugorzędowego wiązania amidowego w białkach i innych związkach organicznych. Reakcja opiera się na zdolności ninhydryny, utlenionej formy tlenku aminy N-chlorosukcynimidu (NCS), do tworzenia kolorowych kompleksów z aminokwasami i ich pochodnymi. Jeśli w cząsteczce białka lub innego związku organicznego obecne są grupy aminowe, ulegną one kondensacji z ninhydryną, tworząc barwny związek o określonym odcieniu. Dlatego reakcję ninhydrynową wykorzystuje się do określenia cech strukturalnych białek oraz do analizy dynamiki i czystości odczynników w układach biologicznych.

Aby przeprowadzić reakcję z ninhydryną, należy wykonać następujące kroki:

1. Przygotuj roztwór ninhydryny i dodaj go do badanej próbki. 2. Mieszaj zawartość roztworu przez pewien czas. 3. Pozostaw mieszaninę na kilka godzin lub dni - zależy to od konkretnych instrukcji. 4. Oceń uzyskaną barwę roztworu i porównaj ją z typowym wzorem na próbkach, w których występuje lub nie ma grupy aminowej. Zalety stosowania metody ninhydrynowej w stosunku do innych metod opartych na detekcji kwasowości resztkowej (np. metoda Sholla) są następujące:

- Eutrofizacja większości próbek w większości przypadków nie pozwala na ich badanie optyczne, nawet przy dłuższym czasie zanurzenia w rozpuszczalniku. Stosując metodę ninowodorową można uniknąć problemów związanych z rozcieńczeniem i równoległym zakwaszeniem roztworu przed wykonaniem badania. - Wynikiem badań spektrofotometrycznych jest jedynie pomiar zawartości kwasów resztkowych. Zatem informację o obecności amidów uzyskuje się pośrednio, a tak uzyskana wartość może nie być bezpośrednio skorelowana z ilością wykrytych amidów. Ta wada jest bardziej charakterystyczna dla metody standardowej, metody Sholla, niż dla reakcji ninowodorowej, która ma wyraźną zaletę przy badaniu próbek o dużej zawartości resztkowych produktów zawierających azot. To właśnie wynik uzyskany z ninhydrenem daje specjalistom wyobrażenie o tym, jak wysokiej jakości otrzymany produkt (i wtedy podniesie temperaturę hydrolizy) lub że otrzymany produkt nie zawiera amidów, a zatem nie potrzebuje wyjaśnienia. Niektóre sole zawierające grupy amidowe, na przykład cykloheksanol indoksylowy sodu, mają wystarczającą absorpcję natywną w obszarze ultrafioletu przy długościach fal od 208 do 270 nm. Wystarczająco dokładne wyniki ilościowe dla takich grup można uzyskać poprzez absorpcję o wysokiej rozdzielczości lub