Αντίδραση Νινυδρίνης

Η **αντίδραση νινυδρίνης (HNR)** είναι μια μέθοδος για τον προσδιορισμό της παρουσίας ή απουσίας πρωτογενούς ή δευτερογενούς δεσμού αμιδίου σε πρωτεΐνες και άλλες οργανικές ενώσεις. Η αντίδραση βασίζεται στην ικανότητα της νινυδρίνης, μιας οξειδωμένης μορφής του αμινοξειδίου Ν-χλωροηλεκτριμιδίου (NCS), να σχηματίζει έγχρωμα σύμπλοκα με αμινοξέα και τα παράγωγά τους. Εάν υπάρχουν αμινομάδες σε ένα μόριο μιας πρωτεΐνης ή άλλης οργανικής ένωσης, θα συμπυκνωθούν με νινυδρίνη, σχηματίζοντας μια έγχρωμη ένωση με μια συγκεκριμένη απόχρωση. Επομένως, η αντίδραση νινυδρίνης χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των δομικών χαρακτηριστικών των πρωτεϊνών και για την ανάλυση της δυναμικής και της καθαρότητας των αντιδραστηρίων σε βιολογικά συστήματα.

Για να πραγματοποιηθεί η αντίδραση νινυδρίνης, πρέπει να ακολουθηθούν τα ακόλουθα βήματα:

1. Παρασκευάστε ένα διάλυμα νινυδρίνης και προσθέστε το στο δείγμα δοκιμής. 2. Ανακατέψτε το περιεχόμενο του διαλύματος για ορισμένο χρόνο. 3. Αφήστε το μείγμα για αρκετές ώρες ή μέρες - εξαρτάται από τις συγκεκριμένες οδηγίες. 4. Αξιολογήστε το προκύπτον χρώμα του διαλύματος και συγκρίνετε το με το τυπικό σχέδιο σε δείγματα όπου υπάρχει ή απουσιάζει η αμινομάδα. Τα πλεονεκτήματα της χρήσης της μεθόδου νινυδρίνης έναντι άλλων μεθόδων που βασίζονται στην ανίχνευση της υπολειμματικής οξύτητας (για παράδειγμα, η μέθοδος Sholl) είναι τα εξής:

- Ο ευτροφισμός των περισσότερων δειγμάτων στις περισσότερες περιπτώσεις δεν επιτρέπει την οπτική τους εξέταση, ακόμη και με μεγαλύτερους χρόνους εμβάπτισης στο διαλύτη. Χρησιμοποιώντας τη μέθοδο νινυδρογόνου, μπορείτε να αποφύγετε προβλήματα που σχετίζονται με την αραίωση και την παράλληλη οξίνιση του διαλύματος πριν από τη διεξαγωγή της μελέτης. - Το αποτέλεσμα των μεθόδων φασματοφωτομετρικής έρευνας είναι μόνο η μέτρηση των υπολειμματικών οξέων. Έτσι, πληροφορίες σχετικά με την παρουσία αμιδίων λαμβάνονται έμμεσα, και η τιμή που λαμβάνεται με αυτόν τον τρόπο μπορεί να μην συσχετίζεται άμεσα με την ποσότητα των αμιδίων που ανιχνεύονται. Αυτό το μειονέκτημα είναι πιο χαρακτηριστικό της τυπικής μεθόδου, της μεθόδου Sholl, παρά της αντίδρασης νινυδρογόνου, η οποία έχει ένα σαφές πλεονέκτημα κατά τη μελέτη δειγμάτων με υψηλή περιεκτικότητα σε υπολειμματικά προϊόντα που περιέχουν άζωτο. Είναι το αποτέλεσμα που λαμβάνεται με το νινυδρένιο που δίνει στον ειδικό μια ιδέα είτε για το πόσο υψηλής ποιότητας έχει λάβει το προϊόν (και στη συνέχεια θα αυξήσει τη θερμοκρασία υδρόλυσης) είτε ότι το προϊόν που προκύπτει δεν περιέχει αμίδια και επομένως δεν περιέχει χρειάζεται διευκρίνιση. Μερικά άλατα που περιέχουν αμιδικές ομάδες, για παράδειγμα, ινδοξύλιο κυκλοεξανόλης νατρίου, έχουν επαρκή φυσική απορρόφηση στην υπεριώδη περιοχή σε μήκη κύματος από 208 έως 270 nm. Επαρκώς ακριβή ποσοτικά αποτελέσματα σε τέτοιες ομάδες μπορούν να ληφθούν με απορρόφηση υψηλής ανάλυσης ή